Production In Vitro D Embryons De Cervid S Mise En Vidence D Un Effet Paternel Au D But Du D Veloppement De L Embryon Caract Risation L Aide Du Mod Le Bovin
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Production in vitro d'embryons de cervidés mise en évidence d'un effet paternel au début du développement de l'embryon caractérisation à l'aide du modèle bovin
L'évaluation de la capacité de développement des spermatozoïdes fécondants devrait permettre de choisir les semences pouvant potentiellement augmenter le nombre de blastocystes produits in vitro. Nous avons d'abord défini des conditions standards de production in vitro chez le cerf sika du Japon (cervus nippon nippon) et le cerf élaphe (cervus elaphus) à partir de protocoles utilisés chez les ruminants domestiques. Le rendement de blastocystes peut varier en fonction de la semence utilisée alors que les pourcentages d'ovocytes fécondés sont identiques. Des travaux réalisés sur des ovocytes bovins fecondés in vitro par des semences de taureaux produisant des pourcentages différents de blastocystes (bonne ou mauvaise fertilité in vitro) ont permis de lier la capacité de développement à des événements suivant la fécondation. Le début de la réplication de l'ADN (phase s) dans les deux pronoyaux puis le premier clivage sont plus précoces quand les ovocytes sont fécondés par une semence permettant un pourcentage élèvé de blastocystes. L'effet paternel observé détermine l'entrée en réplication des deux pronoyaux pendant la phase G1 qui précède l'entrée en phase S. Apres fécondation in vitro d'ovocytes bovins depellucidés avec différents lots de semences de cervidés, nous avons observé que le spermatozoïde de cerf dirige l'entrée en première phase S des deux pronoyaux et qu'il existe également un rapport entre le moment d'entrée en première phase S et le rendement de blastocystes obtenus. Chez les bovins, la caractérisation de cet effet paternel montre que la formation du pronoyau mâle s'accompagne d'une forte augmentation de la voie des pentoses phosphates après fécondation avec des taureaux de bonne fertilité in vitro. L'effet paternel observé déterminerait donc le moment de l'entrée en première phase S sur les deux pronoyaux et ainsi le rendement de blastocystes par le biais de facteurs issus du métabolisme glucidique. En stimulant artificiellement le métabolisme glucidique après fécondation avec des mâles de mauvaises fertilité, l’amélioration du taux de blastocystes serait dons envisageable.
Mise en évidence chez les bovins d'un effet maternel sur la production d'embryons in vitro
Author: Manoel Augusto Monteiro Tamassia (Ingénieur).)
language: fr
Publisher:
Release Date: 2003
L'objectif de cette thèse, a été tout d'abord, d'essayer de mettre en évidence l'influence de la femelle donneuse sur la qualité de l'ovocyte chez la vache.Afin d'isoler le rôle de l'ovocyte dans le taux de développement embryonnaire, l'influence du tractus génital femelle a été supprimée par collecte des ovocytes dans les follicules (par Ovum Pick-Up ; OPU) puis par maturation, fécondation et culture in vitro. Ce protocole expérimental a été appliqué à deux situations physiologiques permettant d'explorer l'influence maternelle sous plusieurs approches. Tout d'abord, nous avons utilisé des génisses issues de clonage embryonnaire. Dans un second temps, ce protocole expérimental a été appliqué à 10 vaches d'origines familiales différentes (non apparentées). Ce sperme ne pouvait donc pas être considéré comme le facteur limitant du taux de développement. Nous avons ainsi démontré scientifiquement l'existence d'un effet maternel, c'est-à-dire d'une influence des facteurs maternels ovocytaires, sur le développement embryonnaire (in vitro). Ce travail a permis d'isoler des vaches donneuses d'ovocytes de " bonne " et " mauvaise " qualité. Nos recherches ont ensuite porté sur le(s) mécanisme(s) pouvant être responsable(s) de ces différences d'aptitude au développement in vitro entre femelles. Cette recherche a été plus particulièrement axée sur le métabolisme énergétique : réserves d'ATP, quantité de mitochondries (d'ADN mitochondrial) et séquence de l'ADN mitochondrial. Seules les mutations de l'ADN mitochondrial ont réellement permis de différencier les deux phénotypes de qualité ovocytaire.Ces travaux de thèse ont donné lieu à la rédaction de 3 articles (2 publiés, 1 soumis)
Co-culture d'embryons bovins et de cellules épithéliales d'oviducte
L'oviducte joue un rôle central dans le transport et la préparation des gamètes, la fécondation et le développement précoce. Un dialogue embryo-maternel s'établit pour assurer le succès du développement de l'embryon et de son transport vers le site d'implantation. L'objectif principal de ce travail était de confirmer l'existence d'un dialogue moléculaire et fonctionnel précoce grâce à la coculture d'embryons bovins produits in vitro sur des cellules épithéliales tubaires bovines (BOEC). Nous avons montré que les BOEC ont un effet important sur le développement embryonnaire précoce, particulièrement pendant les 4 premiers jours. Cet effet ce traduit par un clivage accéléré, une modulation des gènes exprimés après l'activation du génome embryonnaire, un taux plus élevé de développement au stade de blastocyste et une adaptation de l'expression génique de ces blastocystes. En retour, les embryons induisent dans les BOEC, des changements d'expression de facteurs impliqués dans la réponse à l'interféron. Une spécificité régionale des profils d'expression a également été observée dans l'oviducte.